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细胞冻存液作为冻存细胞时的液体环境，给细胞提供着营养和保护作用，可使冰点降低，提高细胞膜对水的通透性，能使细胞内水分在冻结前透出细胞，防止或减少冰晶对细胞的损伤，使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要时直接复苏就可恢复细胞活性。传统的细胞冻存液是使用培养基、血清和DMSO按照一定的比例混合，因其中的血清成分复杂、批次差异大等缺点，其应用具有局限性，且需要采用程序性降温的冻存方法(4℃→-20℃→-80℃→液氮)，费时费力。

非程序细胞冻存液(无血清/蛋白/酚红)化学成分明确，含有糖类、氨基酸等营养物质以及DMSO等多种保护剂组合，大大降低了在冻存过程中冰晶对于细胞的损伤，有效提高细胞复苏率和活力；不含血清和蛋白成分，无任何动物源组分，减少外源因子和污染源，更加安全、稳定；同时可省去繁琐费时的程序性降温过程，可直接重悬细胞后置于-80℃保存，或次日转移到液氮中。

非程序细胞冻存液(无血清/蛋白/酚红)高效、安全、稳定、操作便捷，与传统细胞冻存液相比具有明显优势(表1)，冻存细胞复苏后的存活率也有明显提高(表2)，推荐用于常规哺乳动物细胞(包括肿瘤或转化细胞系、原代细胞、干细胞、免疫细胞等)的冻存，尤其适合无血清培养的细胞冻存。因本产品不含酚红，所以也适用于激素相关实验细胞的冻存。按照一般情况冻存1管细胞使用1mL冻存液计算，本产品可以用于大约100管细胞的冻存。

• 使用时，可直接将冻存液从4℃取出使用。冻存过程中，在将冻存液加入到细胞之后，请尽量在冰袋附近操作，因为低温可以避免保护剂对细胞造成损伤。
  
• 请保证细胞冻存管完全密封，避免在复苏过程中冻存管炸裂。
  
• 理论上，本产品适用于各种哺乳动物细胞的冻存，但因细胞系种类繁多，无法逐一验证，因此我们推荐您在第一次使用本产品之前，实现对所冻存的细胞进行至少为期1周的试验性细胞冷冻保存培养，确认性能后再进行正式冻存。
  
• 本产品为无菌包装，无需过滤，请注意无菌取用。
  
• 为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

• 贴壁细胞制备细胞悬液：(悬浮细胞请忽略此步骤)
  
  • 将旧培养基吸除，用PBS清洗两遍。
    
  • 在培养瓶中加入少许胰酶，以能覆满瓶底为限。将培养瓶平置于培养箱中消化约1～2分钟，期间在显微镜下观察，一旦发现细胞间隙增大、细胞变圆、比较松动后，立即终止消化(个别难消化细胞需要延长消化时间，但要避免消化过度)。
    
  • 加入适量温浴好的完全培养基终止消化，轻轻吹打均匀细胞。
• 贴壁细胞和悬浮细胞的冻存：
  
  • 取少量细胞悬液细胞计数，算出细胞总数和所需细胞冻存液的量。细胞的冻存密度以1×10⁶～1×10⁷ cells/ml为宜。
    
  • 将所需量的细胞悬液转移至适当离心管中，200～500×g，离心3～5分钟，弃上清收集细胞。(离心速度和时间取决于细胞类型)
    
  • 向细胞沉淀中加入适量无血清非程序细胞冻存液，用移液器轻轻吹打以重悬细胞，分装于无菌细胞冻存管中，严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。
    
  • 直接置于-80℃冰箱中储存，细胞可至少保存一年；或者-80℃过夜后，次日将细胞投入液氮中长期储存。

• 自液氮罐或-80℃冰箱中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，立即放入37℃水浴中快速解冻(避免冰晶重新结晶而造成细胞死亡)，轻摇冷冻管使其在1～2分钟内全部融化，以75%酒精擦拭冻存管外部，移入无菌操作台内。
  
• 将解冻的细胞悬液移至15mL无菌离心管中，再加入5～10mL预热好的完全培养基，轻轻混合均匀，200～500×g，离心3～5分钟，弃上清收集细胞。(离心速度和时间取决于细胞类型)
  
• 加入预热好的完全培养基，混合均匀，转移到细胞培养皿或培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。